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    實時PCR實驗

    簡要描述:實時PCR實驗(real-time PCR),屬于定量PCR(Q-PCR)的一種,以一定時間內(nèi)DNA的增幅量為基礎進行DNA的定量分析。定量方式包括定量和相對定量。可檢測mRNA,microRNA,lncRNA和DNA水平的基因拷貝數(shù)變化。

    • 更新時間:2022-12-22
    • 瀏覽次數(shù):1189

    詳細介紹

    實時PCR實驗具體方法

    1.SYBRGreen法:

    在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。

    SYBR定量PCR擴增熒光曲線圖

    PCR產(chǎn)物熔解曲線圖(單一峰圖表明PCR擴增產(chǎn)物的單一性)

    2.TaqMan探針法:

    探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。

    二、服務流程

    1、引物設計與合成
    2、DNA/RNA抽提
    3、反轉(zhuǎn)錄(針對RNA)
    4、上機定量分析
    三、客戶提供
    1、全血、組織或細胞。
    2、引物,或由豐核提供。
    3、基因信息:目的基因名稱、物種和序列(或GenBank Accession Number)。
    四、交付內(nèi)容
    實驗報告:詳細操作步驟
    原始數(shù)據(jù):溶解曲線圖,擴增曲線圖,ct值

    實時PCR實驗服務列表

    項目

    備注

    周期

    引物設計與合成

     

    3個工作日

    提取

    RNA提取、miRNA提取、DNA提取

    2個工作日

    反轉(zhuǎn)錄

     

    2個工作日

    qPCR反應

    SYBR Green方法,相對定量

    2個工作日

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