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    CRISPR/Cas12a系統(tǒng)實驗

    簡要描述:CRISPR/Cas12a系統(tǒng)實驗:CRISPR/Cas12a(原稱 Cpf1)屬于 Class 2 Type V 型 CRISPR 系統(tǒng),是細菌與古菌的適應(yīng)性免疫機制,用于識別并切割入侵的病毒或質(zhì)粒 DNA。與 Cas9 相比,其du特的工作模式使其在基因編輯、分子檢測及多基因調(diào)控中展現(xiàn)顯著優(yōu)勢。

    • 更新時間:2025-07-09
    • 瀏覽次數(shù):92

    詳細介紹

    一、系統(tǒng)定義與生物學(xué)起源

    CRISPR/Cas12a(原稱 Cpf1)屬于 Class 2 Type V 型 CRISPR 系統(tǒng),是細菌與古菌的適應(yīng)性免疫機制,用于識別并切割入侵的病毒或質(zhì)粒 DNA。與 Cas9 相比,其du特的工作模式使其在基因編輯、分子檢測及多基因調(diào)控中展現(xiàn)顯著優(yōu)勢。


    二、核心分子機制與技術(shù)特性

    (一)作用流程

    (二)關(guān)鍵特性對比(Cas12a vs Cas9)

    參數(shù)CRISPR/Cas12aCRISPR/Cas9
    蛋白大小1,200-1,300 氨基酸(更?。?/td>1,000-1,600 氨基酸
    RNA 依賴僅需 crRNA(無 tracrRNA)需 crRNA + tracrRNA 或嵌合 sgRNA
    crRNA 加工自主 RNase 活性(內(nèi)置加工能力)依賴宿主 RNase III 和 tracrRNA
    切割末端類型黏性末端(5' 突出) 平末端
    PAM 識別序列5'-TTTN/TTTV-3'(富含 T)5'-NGG-3'(富含 G)
    核酸酶結(jié)構(gòu)域單一 RuvC 結(jié)構(gòu)域HNH + RuvC 雙結(jié)構(gòu)域
    反式切割活性有(可非特異性切割 ssDNA)

    • V 表示 A/C/G(非 T),如 5'-TTTA/TTTC/TTTG-3'。

    • 黏性末端 更易觸發(fā)同源重組修復(fù)(HDR),提升精準編輯效率。


    三、優(yōu)勢與應(yīng)用場景

    (一)技術(shù)優(yōu)勢

    1. 多基因編輯高效性

      • 單一 crRNA 陣列可同時靶向多個基因,無需重復(fù)構(gòu)建 tracrRNA,適用于復(fù)雜通路調(diào)控。

    2. AT 富集基因組適配性

      • 對富含 AT 的基因組(如植物、寄生蟲)編輯效率顯著高于 Cas9。

    3. 低脫靶風(fēng)險

      • 嚴格依賴 PAM 激活,且反式切割活性可關(guān)閉,全基因組脫靶率低于 Cas9。

    4. 遞送便捷性

      • 蛋白更小,更易包裝進 AAV 等病毒載體,適合體內(nèi)基因治療。

    (二)核心應(yīng)用領(lǐng)域

    應(yīng)用方向案例優(yōu)勢體現(xiàn)
    多基因敲除玉米中同步編輯 3 個抗旱基因,編輯效率 >60%crRNA 陣列簡化設(shè)計
    精準基因插入利用黏性末端增強 HDR,實現(xiàn)人源 FIX 凝血yin子基因定點修復(fù)高保真修復(fù)
    分子診斷結(jié)合反式切割活性開發(fā) 核酸檢測(CRISPR-DETECT)高靈敏度、無需 PCR 擴增
    抗病毒研究家蠶中編輯 BmNPV 病毒受體基因,抗病毒效率較 Cas9 提升 40%高效切割 AT 富集區(qū)
    基因治療載體優(yōu)化Cas12b(更小變體)脫靶率較 Cas9 降低 50%,適合臨床高安全性遞送


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